Análisis de afinidad de anexina A5
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En biología molecular, un Análisis de afinidad de anexina A5 está pasando por una prueba para cuantificar el número de células apoptosis. El ensayo utiliza la proteína annexin A5 apoptótica de la etiqueta y las células muertas, y los números se cuentan con Citometría de flujo o un microscopio de fluorescencia.[1]
La anexina a5 la proteína se une a las células apoptotic en el uso de una forma dependiente de calcio Fosfatidilserina-que contengan las superficies de la membrana que están generalmente presentes sólo en el prospecto interno de la membrana.
Fondo
Apoptosis es una forma de muerte celular programada que es utilizada por el cuerpo para eliminar las células senescentes, dañadas o no deseadas de los tejidos. Eliminación de células apoptóticas se realiza vía fagocitosis por células blancas de la sangre tales como macrófagos y células dendríticas. Glóbulos blancos fagocíticos reconocer células apoptóticas por su exposición de fosfolípidos cargados negativamente (fosfatidilserina) en la superficie celular.
En las células normales, los fosfolípidos negativos residen en el lado interno de la membrana celular mientras que la superficie externa de la membrana es ocupada por los fosfolípidos sin cargar. Después de que una célula ha entrado en apoptosis, los fosfolípidos cargados negativamente son transportados a la superficie externa de la célula por una proteína hipotética conocida como scramblase. Glóbulos blancos fagocíticos expresan un receptor que puede enlazar y detectar los fosfolípidos cargados negativamente en las superficies de la célula apoptótica. Después de la detección se eliminan las células apoptóticas.
Detección de muerte celular con anexina A5
Células apoptóticas individuales saludables se eliminan rápidamente por los fagocitos. Sin embargo, en procesos patológicos, la eliminación de células apoptóticas puede ser retrasada o incluso ausente. Mueren las células en el tejido puede ser detectado con anexina A5. Etiquetado de anexina A5 con moléculas fluorescentes o radiactivas permite detectar obligatorio de etiquetado anexina A5 a la superficie de la célula de células apoptóticas. Después de atar a la superficie de fosfolípidos, anexina A5 monta en un racimo trimérica. Este trímero consiste en tres annexin A5 moléculas que están enlazadas entre sí mediante interacciones no covalentes de proteínas. La formación de anexina A5 trimers resulta en la formación de un enrejado cristalino bidimensional en la membrana de fosfolípidos. Este agrupamiento de anexina A5 en la membrana grandemente aumenta la intensidad de anexina A5 cuando marcado con una sonda fluorescente o radiactiva. Formación de cristales de dos dimensiones se cree que causan internalización de anexina A5 a través de un novedoso proceso de endocitosis Si se produce en las células que se encuentran en la fase temprana de la ejecución de la muerte celular.[2] Internalización además amplifica la intensidad de la anexina A5 teñido de la célula.
Annexin A5 se ha utilizado para detectar sucesivamente las células apoptotic en vitro y en vivo.[1][3] Procesos patológicos en que apoptosis ocurre incluyen inflamación, daños de la isquemia del corazón causado por el infarto de miocardio, apoptosis células blancas de la sangre y las células musculares lisas presentan en las placas ateroscleróticas de los vasos sanguíneos, órganos trasplantados en el paciente donante que son rechazadas por el sistema inmune o células tumorales que están expuestas a citostáticos durante la quimioterapia.
La detección no invasiva de tejido enfermo con, por ejemplo, radiactivo etiquetado anexina A5 es el objetivo de una reciente línea de investigación conocida como proyección de imagen Molecular.
La proyección de imagen molecular de muerte celular utilizando radiactivos anexina A5 puede llegar a ser de importancia clínica para diagnosticar la vulnerabilidad de las placas ateroscleróticas (inestables ateroesclerosis),[4] insuficiencia cardíaca,[5] rechazo de trasplante,[6] y para monitorizar la eficacia de la anti-cáncer terapia.[7][8]
Referencias
- ^ a b van Engeland M Nieland LJ, Ramaekers FC, B Schutte, Reutelingsperger CP (enero de 1998). «Annexin ensayo V-afinidad: una revisión en un sistema de detección de apoptosis basada en exposición de fosfatidilserina ". Citometría de 31 (1): 1 – 9. doi:10.1002 / (sici) 1097-0320 (19980101) 31: 1 < 1::aid-cyto1 > 3.0.co;2-r. PMID9450519.
- ^ Kenis H, van Genderen H, Bennaghmouch A et al (diciembre de 2004). "Expresada por la superficie de la célula fosfatidilserina y annexin A5 abierto un nuevo portal de entrada de la célula". J Biol Chem. 279 (50): 52623-9. doi:10.1074/jbc. M409009200. PMID15381697.
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