Conteo de células

Ir a: navegación, búsqueda de

Conteo de células es cualquiera de varios métodos para la contando o similar cuantificación de células de En Ciencias de la vida, incluyendo tratamiento y diagnóstico médico. Es un subconjunto importante de Citometría de, con aplicaciones en investigación y la práctica clínica. Por ejemplo, la conteo sanguíneo completo puede ayudar a un médico para determinar por qué un paciente se siente bien y qué hacer para ayudar. Recuento dentro de líquido medios de comunicación (tales como sangre, plasma, ganglios linfáticos, o de laboratorio agua de enjuague) se expresan como un número de células por unidad de volumen, expresando así una concentración (por ejemplo, 5.000 células por mililitro).

Contenido

  • 1 La necesidad para el recuento de células
  • 2 Métodos
    • 2.1 Cámara de conteo
    • 2.2 Placas y recuento de UFC
    • 2.3 Espectrofotometría de
    • 2.4 Resistencia eléctrica
    • 2.5 Citometría de flujo
    • 2.6 Análisis de imagen
  • 3 Referencias

La necesidad para el recuento de células

Numerosos procedimientos en medicina y biología requieren el conteo de las células. Por el recuento de células en un conocido pequeño volumen, la concentración puede ser mediada. Aquí están varios ejemplos de la necesidad para el recuento de células:

  • En medicina, la concentración de varios células de la sangre, tales como células de sangre rojas y glóbulos blancos, puede dar información crucial sobre la situación de salud de una persona (ver: conteo sanguíneo completo).
  • Del mismo modo, la concentración de bacterias, virus y otros agentes patógenos En sangre o en otras fluidos corporales puede revelar información sobre el progreso de una enfermedad infecciosa y sobre el grado de éxito con que la sistema inmune se ocupa de la infección.
  • La concentración de células debe ser conocido por muchos experimentos en biología molecular, con el fin de ajustar en consecuencia la cantidad de reactivos y productos químicos que se aplican en el experimento.
  • Estudios que examinan la tasa de crecimiento de microorganismos (en otras palabras: Qué tan rápido se dividir para crear nuevas células) requieren conteo celular.
  • Las medidas de viabilidad celular, es decir, medir y calcular la fracción de células muertas y vivas, por ejemplo de células exponen al veneno.

Métodos

Existen varios métodos para el recuento celular. Algunos son primitivos y no requieren equipo especial, así se pueden hacer en cualquier biológico laboratorio, mientras que otras dependen de aparatos electrónicos sofisticados.

Cámara de conteo

Artículo principal: Hemocitómetro
Una cámara de conteo

A cámara de conteo, también conocida como hemocitómetro, es un portaobjetos de microscopio está especialmente diseñado para permitir el conteo de células. La diapositiva tiene un fregadero en el medio; la zona del fregadero está marcada con una cuadrícula. Una gota de una cultivo de células se coloca en el fregadero. Observando la muestra bajo la microscopio, el investigador utiliza la red para contar manualmente el número de células en un área determinada. La profundidad de la pileta está predefinida, así se puede calcular el volumen de la cultura de contado y con ella la concentración de las células.

Los compartimientos de cuenta se utilizan en clínica los recuentos sanguíneos. Su ventaja es ser barato y rápido; Esto hace el método de cuenta preferido en experimentos biológicos rápido en el que deba determinarse simplemente si un cultivo celular ha crecido como se esperaba. Generalmente la cultura examinada debe ser diluido, de lo contrario la alta densidad de células haría imposible de contar. La necesidad de dilución es una desventaja, que cada dilución suma inexactitud a la medida.[1]

Placas y recuento de UFC

Artículo principal: Unidad Formadora de colonias
Una imagen de las colonias de aureus Staphylococcus crecen en una placa de agar (luz transmitida). Tal homogéneo colonias de propagación son convenientes para el recuento de UFC.

Para cuantificar el número de células en un cultivo, las células pueden ser simplemente plateadas en un plato de Petri con medio de crecimiento. Si las células se distribuyen eficientemente en la placa, puede ser generalmente asumido que cada célula dará lugar a un solo Colonia o Formadoras de unidad (UFC). Las colonias se pueden contar y basadas en el volumen conocido de cultura que se extendió en la placa, se puede calcular la concentración de la célula.

Como con cámaras de conteo, culturas generalmente necesitan ser diluido mucho antes de la galjanoplastia; de lo contrario, en lugar de obtener colonias solas pueden ser contadas, formarán un supuesto "césped": miles de colonias de mentira sobre la otra. Además, galjanoplastia es el método más lento de todos: mayoría de los microorganismos necesita al menos 12 horas para formar colonias visibles.

Aunque este método puede ser desperdiciador de tiempo, da una estimación precisa del número de células viables (porque sólo serán capaces de crecer y formar colonias visibles). Por lo tanto se utiliza extensivamente en experimentos con el objetivo de cuantificar el número de células resistentes a medicamentos u otras condiciones externas (por ejemplo la Experimento de Luria-Delbrück o la ensayo de protección de gentamicina). Además, la enumeración de colonias en placas de agar puede facilitarse considerablemente mediante el uso de Contadores de Colonia.

Espectrofotometría de

Un espectrofotómetro

Suspensiones celulares son turbio:: se absorber el o dispersión de la luz dejando que el resto pase a través. Cuanto mayor sea la concentración celular es, cuanto mayor sea la turbidez. Espectrofotómetros son aparatos eléctricos que pueden medir la intensidad de la luz con mucha precisión. La cultura se coloca en un transparente cubeta de, se coloca la cubeta en la máquina, y la densidad óptica puede medirse inmediatamente. Densidad óptica (OD) es proporcional a la biomasa en la suspensión de células. Espectrofotómetro para medir la turbidez de las culturas se conoce como turbidometry.

En una suspensión con un OD de 1, 90% de la luz en una determinada longitud de onda está siendo absorbida o dispersada. Entonces es importante diluir la suspensión de células con el fin de obtener lecturas fiables. En una longitud de onda de 650 nm las lecturas confiables son aquellas por debajo de 0,7. De todos los aparatos eléctricos utilizados para medir la biomasa, un espectrofotómetro es el más barato y su funcionamiento más rápido y más sencillo. Esto ha hecho espectrofotometría de los métodos de elección para la medición rápida de crecimiento bacteriano y las aplicaciones relacionadas. Hay espectrofotómetros que varias cubetas pueden insertarse a la vez, reduciendo el tiempo de trabajo aún más. Además, existen espectrofotómetros que requieren volúmenes muy pequeños de la cultura, tan poco como 1 microlitro. Esto puede ser una ventaja si la cultura es preciosa y no puede desperdiciarse. Inconveniente de Espectrofotometría es su exactitud limitada; es el único método en el cual las células no cuentan directamente — la máquina mide la luz, no de las células. Esto, combinado con la estocástico naturaleza de las culturas líquidas, permite sólo una estimación del número de células.

Resistencia eléctrica

El electrodo de un contador Coulter

A Contador de Coulter es un aparato que puede contar las células, así como medir su volumen. Está basado en el hecho de que las células muestran grandes resistencia eléctrica; en otras palabras, que llevan a cabo casi no electricidad. En un contador Coulter las células, nadando en una solución que conduce la electricidad, son aspirado uno por uno en un espacio pequeño. Que flanquean el espacio es dos electrodos conducir la electricidad. Cuando ninguna célula está en la brecha, electricidad fluye sin cesar, pero cuando una célula es aspirada en el boquete de la corriente es resistida. El contador Coulter cuenta el número de estos eventos y también mide la actual (y por lo tanto la resistencia), que directamente se correlaciona con el volumen de la célula atrapada. Un sistema similar es el CASY celular tecnología.

Contadores Coulter y CASY son mucho más baratos que los citómetros de flujo y para aplicaciones que requieren un número de células y tamaños, tales como ciclo celular investigación, son el método de elección. Su ventaja sobre los métodos anteriores es la gran cantidad de células que pueden procesarse en corto tiempo, a saber: miles de células por segundo. Esto ofrece gran precisión y significación estadística.

Citometría de flujo

Un citómetro de flujo

Citometría de flujo es por lejos el método más sofisticado y caro para la célula contando. En un citómetro de flujo las células fluyen en una corriente estrecha delante de un láser viga. El rayo golpea uno a uno, y un detector de luz recoge la luz que es reflejada por las células.

Citómetros de flujo tienen muchas otras capacidades, analizar la forma de las células y sus estructuras internas y externas, así como medir la cantidad de específicos proteínas y otros productos bioquímicos en las células. Por lo tanto, citómetros de flujo raramente son adquiridos con el único propósito de contar las células.[citación necesitada]

Análisis de imagen

Recientes enfoques consideran el uso de imágenes de microscopía de alta calidad sobre la cual un Clasificación Estadística algoritmo se utiliza para realizar la detección automatizada de la célula y contando como un Análisis de imagen tarea.[2] Generalmente se realiza con una tasa de error constante como un proceso de tipo off-line (batch). Una gama de clasificación de la imagen técnicas pueden emplearse para este propósito.[3]

Referencias

  1. ^ "Uso de hemocitómetro básica".
  2. ^ Han, J.W., Breckon, T.P., Randell, D.A., Landini, G. (2012). "La aplicación de la clasificación de la máquina de vectores soporte para detectar núcleos celulares para microscopía automatizada" (PDF). Visión artificial y aplicaciones (Springer) 23 (1): 15 – 24. doi:10.1007/s00138-010-0275-y. 8 de abril 2013.
  3. ^ Han, J.W., Breckon, T.P., Randell, D.A., Landini, G. (julio de 2008). Quistes radiculares y clasificación de epitelios de queratoquistes odontogénicos usando clasificadores de Haar en cascada. Proc. XII Conferencia anual de análisis y la interpretación de imágenes médicas (PDF). págs. 54-58. 8 de abril 2013.

Otras Páginas

Obtenido de»https://en.copro.org/w/index.php?title=Cell_counting&oldid=649269426"