Ensayo

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Para la comuna francesa en el Departamento de Indre-et-Loire, ver Ensayo, Indre-et-Loire.

Un ensayo es un procedimiento investigativo (analítico) en Medicina de laboratorio, Farmacología, Biología Ambiental, entrega continua, y biología molecular para evaluar cualitativamente o cuantitativamente medir la presencia o cantidad o la actividad funcional de una entidad de destino (el analito). El analito puede ser un drogas o sustancia bioquímica o un célula en un organismo orgánicos o muestra.[1][2] Generalmente se denomina la entidad mide el analito, o la mensurando o la blanco del ensayo. Generalmente, el ensayo pretende medir un propiedad intensiva del analito y expresarla en la unidad de medida correspondiente (p. ej. molaridad, densidadactividad funcional en unidades de enzima internacionales, grado de algún efecto en comparación con un estándar, etc..).

Si el análisis implica la adición de exógena Reactantes (reactivos) y sus cantidades se mantienen fijos (o en exceso) para que la cantidad (y calidad) de la blanco son el único factor limitante para el proceso de análisis de la reacción, y la diferencia en el resultado del ensayo se utiliza para deducir la calidad desconocida o cantidad de los el objetivo en cuestión. Algunos ensayos)por ejemplo, Ensayos bioquímicos) pueden ser similares a o superposición con Análisis químico y titulación. Pero en general, análisis de material biológico o fenómenos que tienden a ser intrínsecamente más complejas ya sea en composición o en el comportamiento o ambos. Así la lectura de un ensayo puede ser bastante ruidosa y puede implicar mayores dificultades en la interpretación que una titulación química precisa. Por otro lado, mayores ensayos cualitativos de generación, especialmente pruebas biológicas, pueden ser mucho más gruesa y menos cuantitativa (por ejemplo, contando la muerte o la disfunción de un organismo o células en una población, o algún cambio descriptivo en alguna parte del cuerpo de un grupo de animales).

Los ensayos se han convertido en una parte rutinaria de la moderna medicina, medio ambiente, farmacéutica, forense y muchos otros negocios en diversas escalas de industrial a nivel de la acera o terreno. Los ensayos que son comercialmente muy demandados han sido bien investigados en sectores de investigación y desarrollo de industrias profesionales, experimentado las generaciones de desarrollo y sofisticación y se convierten en derechos de autor de propiedad intelectual vía altamente competitivo proceso de patentamiento. Tal escala industrial ensayos como éstos a menudo se realizan en bien equipado Laboratorios y con organización automatizada del procedimiento — de pedir un ensayo pre analítica muestra procesamiento (muestras, manipulaciones necesarias por ejemplo spinning para separación u otros procesos, tomar si es necesario, almacenamiento, recuperación, pipeteado aspiración etc..). Los analitos se prueban generalmente en alto rendimiento Autoanalizadores, y los resultados son verificados automáticamente volvió a ordenar a los proveedores de servicios y usuarios finales. Estos se hacen posibles mediante el uso de avanzadas Sistema informático de laboratorio interfaces con múltiples terminales de ordenador con los usuarios finales, servidores centrales, los instrumentos de autoanalyser física y otros autómatas.

Contenido

  • 1 Etimología
  • 2 Pasos generales
  • 3 Tipos de análisis basados en la naturaleza del proceso de análisis
  • 4 Tipos de análisis basados en los objetivos se mide
    • 4.1 DNA
    • 4.2 Proteína
    • 4.3 RNA
    • 4.4 Ensayos de recuento, viabilidad, proliferación o la citotoxicidad de la célula
    • 4.5 Tensioactivos
    • 4.6 Otros ensayos de célula
    • 4.7 Petroquímica
    • 4.8 Virología
    • 4.9 Secreciones celulares
    • 4.10 Drogas
  • 5 Calidad de un ensayo
  • 6 Véase también
  • 7 Referencias
  • 8 Enlaces externos

Etimología

Según la etimología[3] el verbo ensayo, al menos desde el siglo XIII, pretende "intentar, esforzarse, luchar; prueba la calidad de", de la Anglo-p. assaierDe assai (n.), de O.Fr. essai "juicio" y el Sustantivo ensayo por lo tanto significa "prueba, prueba de calidad, prueba de carácter", mediados del siglo XIV, de Anglo-p. assai y el significado de "análisis" es de finales del siglo XIV. Para ensayo de monedas, esto significó literalmente el análisis de la pureza del oro o plata o cualquier componente precioso se utilizó para representar el verdadero valor de la moneda. Esto podría han traducido más tarde (posiblemente después del siglo XIV) en un sentido generalizado de análisis por ejemplo de un componente importante o principal de un objetivo dentro de una mezcla como ingrediente activo de un medicamento dentro de los excipientes inertes de una formulación farmacológica que originalmente solía medirse por su acción real sobre un organismo (por ejemplo letal dosis o dosis inhibitoria).

Pasos generales

Un ensayo (análisis) nunca es un proceso aislado y debe combinarse con procedimientos previos y post analíticos. La comunicación de la información (p. ej. solicitud para realizar un análisis y procesamiento de la información) o una muestra de manipulación (por ejemplo transporte de colección y procesamiento) que se realizan hasta el comienzo de un ensayo son la preanalytic a unos pasos. Asimismo, después del ensayo, el resultado puede documentar, verificado y transmitido/comunicado en los pasos que se llaman post-analítica a unos pasos. Como cualquier multi-step información manejo y transmisión sistemas, variaciones y errores en los resultados definitivos comunicados de un ensayo implican partes correspondientes en cada tal paso; es decir, no sólo las variaciones analíticas y errores intrínsecos al ensayo sí mismo pero también variaciones y errores en preanalytic y post pasos analíticos. Puesto que el ensayo sí mismo (el paso analítico) consigue mucha atención,[4] pasos que reciben menos atención por la cadena de usuarios, es decir, la preanalytic y los pasos analíticos post, son a menudo menos estrictamente regulados y generalmente más propenso a errores, por ejemplo, preanalytic pasos en ensayos de laboratorio médico pueden contribuir a 32 – 75% de todos los errores de laboratorio.[5]

Ensayos pueden ser muy diversos, pero generalmente involucran los siguientes pasos generales:

  1. Manipulación y procesamiento de las muestras con el fin de presentar selectivamente ese objetivo en una forma perceptible o medible de un sistema de detección de identificación de discriminación. Podría implicar una simple separación centrífuga o lavado o filtración o captura por alguna forma de atascamiento selectivo o incluso puede implicar modificar el objetivo p. ej. recuperación del epítopo en ensayos inmunológicos o cortar el objetivo en pedazos por ejemplo en Espectrometría de masas. Generalmente hay varios separar pasos hechas antes de un ensayo y se denominan procesamiento preanalytic. Pero algunas de las manipulaciones pueden ser parte inseparable de la prueba de sí mismo y no así será considerado pre-analítica.
  2. Principio de discriminación/identificación de objetivos específicos:: discriminar de fondo (ruido) de componentes similares e identificar específicamente un componente objetivo particular ("analito") en un material biológico por sus atributos específicos. (por ejemplo, en un POLIMERIZACIÓN EN CADENA ensayo de una cartilla de oligonucleótidos específicos identifica el objetivo de base de sincronización basado en la secuencia de nucleótidos específicos única en el destino).
  3. Sistema de amplificación de señal (o destino):: La presencia y la cantidad de analito que se convierte en una señal detectable que generalmente involucran algún método de amplificación de la señal, por lo que puede ser fácilmente discriminados del ruido y mide, por ejemplo en un POLIMERIZACIÓN EN CADENA ensayo entre una mezcla de secuencias de ADN solamente el objetivo específico es amplificado en millones de copias por un Polimerasa de la DNA enzima para que eso él puede discernir como un componente más prominente en comparación con cualquier otro componente de potencial. A veces la concentración del analito es muy grande y en ese caso puede implicar el análisis de dilución de la muestra o algún tipo de sistema de disminución de la señal que es una amplificación negativa.
  4. Sistema de detección (e interpretación) de la señal:: Sistema de desciframiento de la señal amplificada en una salida de interpretable que puede ser cuantitativa o cualitativa. Puede ser visuales o manual métodos muy crudos o puede ser muy sofisticados detectores electrónicos de digitales o analógicos.
  5. Realce de la señal y el ruido filtrado se puede hacer en cualquiera o todos los pasos anteriores. Desde el más abajo un proceso de pasos durante un ensayo, cuanto mayor sea la posibilidad de transportar el ruido proveniente del proceso anterior y amplificándolo, varios pasos en un análisis sofisticado podría involucrar a diversos medios de arreglos de señales específicas de afilado/mejora y reducción de ruido o arreglos de filtración. Estos pueden ser simplemente en forma de un estrecho paso de banda filtro óptico, o un reactivo de bloqueo en una reacción de Unión que evita el atascamiento no específico o un amortiguamiento de reactivo en un sistema de detección de fluorescencia que impide «autofluorescencia"de objetos de fondo.[citación necesitada]

Tipos de análisis basados en la naturaleza del proceso de análisis

Dependiendo de si un ensayo sólo se ve en un solo momento o tiempo las lecturas tomadas en varios puntos del tiempo, un ensayo puede ser:

  1. Ensayo de punto final:: cuando la única lectura que importa es el resultado final después de un período de incubación del ensayo fijo.
  2. Análisis cinético:: cuando las lecturas se toman varias veces en intervalos de tiempo fijos durante un ensayo y una gráfica de cinética de las lecturas es importante.

Dependiendo de cuántos objetivos o analitos que se miden:

  1. Análisis generalmente son simples o ensayos individuales de meta que generalmente es el valor predeterminado a menos que se denomina multiplex.
  2. Ensayos multiplex son ensayos que en una misma reacción detectan varios analitos simultáneamente.

Dependiendo de la calidad del resultado producido, los ensayos pueden clasificarse en:

  1. Ensayo cualitativo, es decir, ensayos que generalmente dan un pass o fail o positiva o negativa o algunos tal tipo de solamente una pequeña cantidad de gradación cualitativa en lugar de una cantidad exacta.
  2. Análisis semi-cuantitativo, es decir, ensayos que dan la lectura de una manera aproximada, en lugar de un número exacto de la cantidad de la sustancia. Generalmente tienen unas gradaciones más que sólo dos resultados, positivos o negativos, por ejemplo, puntuación en una escala de 1 a 4 + como se utiliza para agrupar pruebas basadas en RBC la sangre aglutinación de en respuesta a la agrupación de reactivos (anticuerpos contra antígenos de grupos sanguíneos).
  3. Ensayos cuantitativos, es decir, ensayos que dan medida cuantitativa numérica exacta y exacta de la cantidad de una sustancia en una muestra. Un ejemplo de tal un ensayo usado en laboratorios para la más común de la coagulación hereditaria enfermedad de sangrado- Enfermedad de von Willebrand es VWF Análisis del antígeno donde la cantidad de FvW presente en una muestra de sangre es medida por un inmunoensayo.
  4. Análisis funcional, es decir, un ensayo que intenta cuantificar el funcionamiento de una sustancia activa en lugar de sólo su cantidad. El equivalente funcional de la VWF ensayo de antígeno es Prueba del Cofactor de ristocetina, que mide la actividad funcional de la VWF presente en un plasma de pacientes mediante la adición exógeno formalina-fijo plaquetas y poco a poco cantidades crecientes de drogas llamado ristocetin mientras que mide la aglutinación de las plaquetas fijas. Un similar análisis sino que se utiliza para un propósito diferente se llama Ristocetina inducida por la agregación plaquetaria o RIPA, que las pruebas de respuesta de las plaquetas en endógeno de un paciente en respuesta a la ristocetina (exógena) y FvW (generalmente endógeno).

Según el general sustrato sobre el que se aplica el principio de ensayo:

  1. Prueba biológica:: cuando la respuesta es p. ej. actividad biológica de los objetos en
    1. Organismo (por ejemplo ratón inyectado con una droga)
    2. ex parte del cuerpo vivo (por ejemplo, la pierna de una rana)
    3. ex vivo órgano (por ejemplo, el corazón de un perro)
    4. ex parte de vivo de un órgano (por ejemplo, un segmento de un intestino).
    5. tejido (por ejemplo, lisado de limulus)
    6. célula (por ejemplo plaquetas)
  2. Ensayo de unión de ligando Cuando un ligando (generalmente una molécula pequeña) une a un receptor (generalmente una proteína grande).
  3. Inmunoensayo de Cuando la respuesta es una reacción de tipo antígeno anticuerpo vinculante.

Dependiendo de la naturaleza del sistema de amplificación de señal de ensayos pueden ser de numerosos tipos, por nombrar algunos:

  1. Ensayo de actividad enzimática:: Las enzimas pueden analizarse por su actividad altamente repetitiva sobre un gran número de sustratos cuando pérdida de sustrato o la fabricación de un producto puede tener un atributo medible como el color o absorbancia en una particular longitud de onda o la luz o por quimioluminiscencia o actividad eléctrica/redox.
  2. Sistemas de detección que pueden utilizar la amplificación de luz por ejemplo, un fotodiodo o un tubo fotomultiplicador o un enfriado dispositivo de carga acoplada.
  3. Radioisótopo etiquetado como sustratos en radioinmunoensayos y ensayos de la diálisis de equilibrio y puede ser detectado por la amplificación en Contadores de GM o Placas de rayos x, o phosphorimager
  4. Reacción en cadena de polimerasa Ensayos que amplifica un DNA (o RNA) de destino en lugar de la señal

Los ensayos pueden ser una combinación de los anteriores p. ej. ensayo inmuno enzimático o EIA, Análisis de enzima del inmunosorbente vinculado.

Dependiendo de la naturaleza del sistema de detección de ensayos pueden basarse en:

  1. Formadoras de colonias o recuento de colonias virtuales:: por ejemplo, la multiplicación de las bacterias o las células de la proliferación.
  2. Fotometría / espectrofotometría de Cuando la absorbancia de una determinada longitud de onda de la luz mientras que pasa a través de una longitud de ruta fija a través de una cubeta de muestra líquida se mide y la absorbancia se compara con un espacio en blanco y con cantidades graduales del compuesto objetivo. Si la luz emitida es de una determinada longitud de onda visible puede ser llamado Colorimetría, o puede implicar por ejemplo longitud de onda específica de luz por el uso de láser y la emisión de fluorescente señales de otra longitud de onda específica que se detecta por medio de filtros ópticos de longitud de onda muy específica.
  3. Transmitencia de la luz puede utilizarse para medir p. ej. eliminación de la opacidad de un líquido creado por partículas en suspensión debido a la disminución en el número de matas durante una plaqueta aglutinación de reacción.
  4. Turbidimetría Cuando la opacidad del derecho transmite luz pasa a través de una muestra líquida se miden por los detectores colocados directamente a través de la fuente de luz.
  5. Nefelometría Cuando las luces dispersas se miden mediante detectores colocados en ángulos fijos a la trayectoria de la luz.
  6. Reflectometría Cuando el color de la luz reflejada por una muestra (generalmente seco) o reactivo es evaluado por ejemplo, las lecturas automatizadas de las tira orina varilla de nivbl ensayos.
  7. Las mediciones viscoelásticas e.g. viscometry, elastografía (p. ej. Tromboelastografía)
  8. Ensayos de conteo: por ejemplo, óptica Flowcytometric Contadores de la célula o partícula, o Coulterprincipio de /Impedance basado en contadores celulares
  9. Imágenes de ensayos, que involucran análisis de imágenes manualmente o por software:
    1. Citometría de:: Cuando las estadísticas de tamaño de las células es evaluada por un procesador de imagen.
  10. Detección eléctrica por ejemplo, que Amperometría, voltametry, coulometría puede ser utilizado directa o indirectamente para muchos tipos de mediciones cuantitativas.
  11. Pueden usar otros ensayos de propiedades físicas en
    1. Osmómetro
    2. Viscosímetro
    3. Electrodos selectivos de iones

Tipos de análisis basados en los objetivos se mide

DNA

Ensayos para el estudio de interacciones de proteínas con DNA incluyen:

  • Ensayo de DNase footprinting
  • Ensayo de atascamiento del filtro
  • Ensayo de cambio de gel

Proteína

  • Ensayo ácido Bicinchoninic (Ensayo BCA)
  • Análisis de la proteína de Bradford
  • Análisis de la proteína de Lowry[6][7]
  • Análisis de la secreción

RNA

  • Corridas nuclear
  • Ribosome profiling

Ensayos de recuento, viabilidad, proliferación o la citotoxicidad de la célula

Un ensayo de conteo celular puede determinar el número de células vivas, el número de células muertas o la relación del tipo de una célula a otra, como la letra y escribir rojo frente a diferentes tipos de Blanco células de la sangre. Esto se mide por diferentes métodos físicos (transmisión de luz, cambio de la corriente eléctrico). Pero otros métodos utilizan estructura celular sondeo bioquímica o fisiología (manchas). Otra aplicación es para controlar cultivo de células (ensayos de de la proliferación celular o citotoxicidad). A medidas de ensayo de citotoxicidad como tóxicos a compuesto químico es células de.

  • Ensayo MTT
  • Celda contar Kit-8 (ensayo de viabilidad celular basado WST-8)
  • (SRBSulforodamina B) ensayo
  • Ensayo de viabilidad de células luminiscentes CellTiter-Glo ®
  • Célula de instrumentos y métodos de conteo: CASY celular tecnología, Contador de Coulter, Detección de impedancia eléctrica de la célula-sustrato
  • Célula ensayos de viabilidad: método de resazurina, Prueba de la ATP, Homodímero de etidio ensayo (detección de células muertas o moribundas), Análisis de agua bacteriológico, Análisis clonogenic, ...

Tensioactivos

  • Un Ensayo MBAS indica aniónicos tensioactivos en el agua con una reacción de azulado.

Otros ensayos de célula

Muchos ensayos de célula han sido desarrollados para evaluar la respuesta de las células (o parámetros específicosbiomarcadores, celular Fisiología. Técnicas utilizadas para study_cells incluyen:

  • reportero de ensayos utilizando es decir Luciferasa, señalización de calcio ensayos utilizando Coelenterazine, CFSE o Calceína
  • Inmunotinción de las células en portaobjetos por Microscopia (Inmunohistoquímica o fluorescencia), en microplacas por fotometría incluyendo la ELISPOT (y su variante FluoroSpot) para enumerar las células B o células específicas de antígeno, en la solución por Citometría de flujo
  • Inmunotinción de las células en portaobjetos por Microscopia, en microplacas por fotometría de
  • Biología molecular técnicas tales como Microarrays de DNA, hibridación in situ, combinado a POLIMERIZACIÓN EN CADENA, Genómica Computacional, y Transfección; Fraccionamiento de la célula o Inmunoprecipitación
  • Ensayos de migración, Ensayo de quimiotaxis
  • Análisis de la secreción
  • Apoptosis ensayos tales como la DNA laddering ensayo, la Ensayo de Nicoletti, caspasa ensayos de actividad, y Anexina V la coloración
  • Ensayo de quimiosensibilidad mide el número de las células tumorales que son matados por un fármaco contra el cáncer
  • Ensayo de tetrámero detectar la presencia del antígeno de células T específicas
  • Ensayo de protección de gentamicina o análisis de supervivencia o ensayo de invasión para evaluar la capacidad de los agentes patógenos (bacterias) para invadir las células eucariotas

Petroquímica

  • Ensayo de crudo

Virología

El Ensayo de titulación viral basada en HPCE utiliza un propietario, alto rendimiento electroforesis capilar sistema para determinar baculovirus Título.

El Ensayo de Trofile se utiliza para determinar Tropismo del VIH.

El viral ensayo de placa es para calcular el número de virus presentes en una muestra. En esta técnica el número de placas virales formado por un inóculo viral se cuenta, de que puede determinarse la concentración del virus real.

Secreciones celulares

Una amplia gama de las secreciones celulares (por ejemplo, un específico anticuerpo o citocina) puede detectarse mediante la ELISA técnica. El número de células que secretan las sustancias particulares puede determinarse usando una técnica relacionada, la ELISPOT ensayo.

Drogas

  • Pruebas de drogas ilegales
  • Ensayo de atascamiento radioligand

Calidad de un ensayo

Cuando múltiples ensayos medir el mismo objetivo sus resultados y utilidad pueden o pueden no ser comparables dependiendo de la naturaleza de los análisis y su metodología, fiabilidad etc.. Tales comparaciones son posibles a través del estudio de los atributos de calidad de los ensayos por ejemplo principios de medición (incluyendo identificación, amplificación y detección), rango dinámico de detección (generalmente la gama de linealidad de la curva estándar), sensibilidad analítica, sensibilidad funcional, especificidad analítica, positiva, valores predictivos negativos, tiempo de la vuelta es decir, el tiempo tomado para terminar un ciclo completo de los pasos hasta el final de la última etapa de post analítica (Informe despacho/transmisión), preanalytic thruput es decir, número de ensayos realizados por unidad de tiempo (generalmente expresado según la hora) etc.. Organizaciones o laboratorios que realizan ensayos para fines profesionales por ejemplo diagnóstico médico y pronósticos, análisis ambiental, procedimiento forense, investigación farmacéutica y desarrollo deben someterse a bien regulado aseguramiento de la calidad incluyendo los procedimientos validación de un método, regular calibración, Control de calidad analítico, Pruebas de aptitud, prueba Acreditación, prueba concesión de licencias y se debe documentar la certificaciones correspondientes de los organismos reguladores con el fin de establecer la fiabilidad de sus ensayos, sobre todo permanecer legalmente aceptable y responsable por la calidad de los resultados del ensayo y también convencer a los clientes utilizar sus análisis comercial/profesional.

Véase también

  • Química analítica
  • MELISA
  • Múltiplex (ensayo)
  • Química farmacéutica
  • Titulación

Referencias

  1. ^ El Diccionario americano de la herencia de la lengua inglesa. Cuarta edición. Houghton Mifflin Company: 2000.
  2. ^ McKean, Erin (ed.). El Diccionario nuevo del americano de Oxford. Segunda edición. Prensa de la Universidad de Oxford: 2005.
  3. ^ http://www.etymonline.com/index.php?term=Assay
  4. ^ Minireview: Pierangelo Bonini, Mario Plebani, Ferruccio Ceriotti y Francesca Rubboli, «Errores en química clínica de la medicina de laboratorio» 2002; v. 48, p. 691-698.
  5. ^ Artículo: Julie A. Hammerling "una revisión de errores médicos en el diagnóstico de laboratorio y donde estamos hoy". Medicina de laboratorio 43:41 2012-44; doi:10.1309 / LM6ER9WJR1IHQAUY
  6. ^ Lowry OH, Rosebrough NJ, AL Farr, Randall RJ (noviembre de 1951). "Medición de la proteína con el reactivo de Folin fenol". J Biol Chem. 193 (1): 265 – 75. PMID14907713.
  7. ^ http://www.animal.ufl.edu/Hansen/Protocols/LOWRY.htm

Enlaces externos

  • La definición del Diccionario de ensayo en Wikcionario

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