Ensayo de DNase footprinting
A Ensayo de DNase footprinting[1] es un Huella de ADN técnica de biología molecular/Bioquímica detecta DNA-proteína interacción con el hecho de que una proteína ligada a ADN a menudo protegerá eso DNA del clivaje enzimático. Esto hace posible ubicar un sitio de unión de la proteína en una determinada molécula de ADN. El método utiliza una enzima, Desoxirribonucleasa (DNasa, para abreviar), para cortar el ADN marcado radiactivamente final, seguido por electroforesis en gel de para detectar el patrón resultante de escote.
Por ejemplo, puede ser el fragmento de ADN de interés POLIMERIZACIÓN EN CADENA amplificado mediante una 32P 5' etiquetado cartilla, con el resultado que muchas moléculas de ADN con una etiqueta radiactiva en un extremo de una cadena de cada molécula trenzada doble. Escote por ADNasa produce fragmentos, el más pequeño de los cuales se moverá más lejos en el gel electroforético. Los fragmentos que son más pequeños con respecto a la 32P-etiqueta end aparecerá más en el gel los fragmentos más largos. El gel se utiliza entonces para exponer una película fotográfica especial.
El patrón de la hendidura de la DNA en ausencia de ADN vinculante proteínas, normalmente denominado ADN libre, es comparado con el patrón de clivaje de ADN en presencia de una proteína de unión a ADN. Si la proteína une a ADN, el sitio de Unión está protegido del clivaje enzimático. Esta protección tendrá como resultado un área clara en el gel que se conoce como la "huella".
Variando la concentración de la proteína de unión al ADN, la afinidad de la proteína puede estimarse según la concentración mínima de proteína en la que se observa una huella.
Esta técnica fue desarrollada por David Galas y Albert Schmitz en Ginebra en 1977[2]
Véase también
- Huella de ADN
- DNasa I
- Ensayo de Toeprinting
Referencias
- ^ Brenowitz M, Senear DF, Shea MA, Ackers GK (1986). "Valoración de huella de DNasa cuantitativa: un método para el estudio de las interacciones DNA proteína". Métodos en enzimología 130:: 132 – 81. doi:10.1016/0076-6879 (86) 30011-9. PMID3773731.
- ^ Galas DJ, Schmitz (septiembre 1978). "Huella de la DNasa: un método simple para la detección de la especificidad de Unión proteína-DNA". Investigación de ácidos nucleicos 5 (9): 3157 – 70. doi:10.1093/Nar/5.9.3157. PMC342238. PMID212715.
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