Etiqueta de la proteína
Etiquetas de la proteína son secuencias del péptido genéticamente injertadas en un proteína recombinante. A menudo estas etiquetas son removibles por agentes químicos o por medios enzimáticos, como proteólisis o intein de empalme. Etiquetas se fijan a las proteínas para los varios propósitos.
Tags afinidad se añaden a las proteínas que pueden ser purificados desde su fuente biológica crudo utilizando una técnica de afinidad. Estos incluyen la proteína de unión a quitina (CBP), proteína de unión a maltosa (MBP), y glutatión-S-transferasa (GST). El etiqueta Poly(HIS) es una proteína ampliamente utilizada; se une a las matrices de metal.
Se utilizan etiquetas de solubilización, especialmente para proteínas recombinantes expresadas en acompañante-deficiente especies tales como E. coli, para ayudar en el plegamiento correcto de proteínas y evitar precipitantes. Estos incluyen tiorredoxina (TRX) y poly(NANP). Algunas etiquetas de afinidad tienen un doble papel como agente de solubilización como la MBP y GST.
Etiquetas de cromatografía se utilizan para modificar propiedades cromatográficas de la proteína para permitirse el lujo de resolución diferente a través de una técnica de separación particular. A menudo, estos consisten en aminoácidos polyanionic, tales como Etiqueta de la bandera.
Epitopo las etiquetas son secuencias de péptidos cortos que se eligen porque alta afinidad anticuerpos puede producir confiablemente en muchas especies diferentes. Estos generalmente son derivados de genes virales, lo que explican su alto immunoreactivity. Incluyen etiquetas del epítopo V5-tag, MYC-tag, y HA-tag. Estas etiquetas son particularmente útiles para El borrar occidental, inmunofluorescencia y inmunoprecipitación los experimentos, aunque también encuentran uso en la purificación del anticuerpo.
Etiquetas de la fluorescencia se utilizan para dar lectura visual en una proteína. GFP y sus variantes son las etiquetas más utilizadas de la fluorescencia. Aplicaciones más avanzadas de GFP incluyen el uso como reportero plegable (fluorescente Si dobla, incoloro si no).
Etiquetas de proteína encuentran muchos otros usos, tales como modificación enzimática específica (por ejemplo, etiquetas de ligasa de biotina) y etiqueta de modificación química (FlAsH). Etiquetas a menudo se combinan para producir modificaciones multifuncionales de la proteína. Sin embargo, con la adición de cada etiqueta viene el riesgo de que la función nativa de la proteína puede ser suprimida o comprometida por las interacciones con la etiqueta. Por lo tanto, después de la purificación, etiquetas se extirpaban por proteólisis específica (por ejemplo, Proteasa TEV, Trombina, Factor Xa o Enteropeptidasa)
Contenido
- 1 Lista de etiquetas de proteína
- 1.1 Etiquetas de péptido
- 1.2 Etiquetas de péptido covalente
- 1.3 Etiquetas de la proteína
- 1.4 Otros
- 2 Aplicaciones
- 3 Referencias
Lista de etiquetas de proteína
Etiquetas de péptido
- AviTag, un péptido que permite Biotinilación por la enzima BirA y la proteína puede ser aislada por estreptavidina (GLNDIFEAQKIEWHE)
- Calmodulina-tag, un péptido enlazado por la proteína calmodulin (KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL)
- etiqueta de poliglutamato, un péptido que enlace eficientemente a la resina de intercambio aniónico como Mono-Q (EEEEEE)
- E-tag, un péptido reconocido por un anticuerpo (GAPVPYPDPLEPR)
- Etiqueta de la bandera, un péptido reconocido por un anticuerpo (DYKDDDDK)[1]
- HA-tag, un péptido reconocido por un anticuerpo (YPYDVPDYA)[2]
- Su etiqueta, 5-10 histidinas por un níquel o cobalto quelato (HHHHHH)
- MYC-tag, un péptido corto reconocido por un anticuerpo (EQKLISEEDL)
- S-tag (KETAAAKFERQHMDS)
- SBP-tag, un péptido que se une a estreptavidina (MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP)[3][4]
- SOFTAG 1, para la expresión mamífera (SLAELLNAGLGGS)
- SOFTAG 3, para la expresión procariota (TQDPSRVG)
- Strep-tag, un péptido que se une a la estreptavidina o la estreptavidina modificado llamado streptactin (Strep-tag II: WSHPQFEK)[5]
- Etiqueta de TC, una etiqueta de tetracysteine que es reconocida por biarsenical FlAsH y ReAsH compuestos (CCPGCC)
- Etiqueta de V5, un péptido reconocido por un anticuerpo (GKPIPNPLLGLDST)[6]
- VSV-tag, un péptido reconocido por un anticuerpo (YTDIEMNRLGK)
- Etiquetas Xpress (DLYDDDDK)
Etiquetas de péptido covalente
- Isopeptag, un péptido que se une covalentemente a pilin-C proteína (TDKDMTITFTNKKDAE)[7]
- SpyTag, un péptido que se une covalentemente a SpyCatcher proteína (AHIVMVDAYKPTK)[8]
Etiquetas de la proteína
- BCCP (Biotina Carboxyl Carrier Protein), una proteína dominio biotinilado por BirA que permite el reconocimiento por estreptavidina
- Glutatión-S-transferasa-la etiqueta, una proteína que se une al glutation inmovilizado
- Proteína verde fluorescente-la etiqueta, una proteína que es espontáneamente fluorescente y puede ser obligado por nanobodies
- Etiqueta de Halo, un transformado hidrolasa se une covalentemente a la resina de HaloLink ™ (Promega)
- Proteína de unión a maltosa-la etiqueta, una proteína que se une a agarosa de amilosa
- Nus-tag
- Tiorredoxina-etiqueta
- Fc-etiqueta, derivada de dominio Fc de la inmunoglobulina, permite la dimerización y solubilización. Puede ser utilizado para la purificación de Protein-A sefarosa
- Diseña etiquetas intrínsecamente desordenadas que contiene desorden promoción de aminoácidos (P, E, S, T, A, Q, G,...)[9]
Otros
- Etiqueta de Ty
Aplicaciones
- Purificación de la afinidad
- Matriz de proteína
- El borrar occidental
Referencias
- ^ Einhauer, A.; Jungbauer, A. (2001). «Péptido ™ de la bandera, una etiqueta de fusión versátil para la purificación de proteínas recombinantes». Diario de métodos bioquímicos y biofísicos 49 (1-3): 455-65. doi:10.1016/S0165-022 X (01) 00213-5. PMID11694294.
- ^ Prakriya, Murali; Feske, Stefan; Gwack, Yousang; Srikanth, Sonal; Rao, Anjana; Hogan, Patrick G. (2006). "Orai1 es una subunidad esencial del poro del canal CRAC". Naturaleza 443 (7108): 230-3. Bibcode:2006Natur.443... 230P. doi:10.1038/nature05122. PMID16921383.
- ^ Keefe, Anthony D.; Wilson, David S.; Seelig, Burckhard; Szostak, Jack W. (2001). "Un solo paso purificación de proteínas recombinantes utilizando un péptido de estreptavidina-atascamiento afinidad Nanomolar, SBP-Tag". Purificación y expresión de la proteína 23 (3): 440 – 6. doi:10.1006/Prep.2001.1515. PMID11722181.
- ^ Gelerter, Bruce (11 de junio de 2014). «CEMP para tratamiento de lesiones y trastornos de la córneos».[¿fuente publicado?]
- ^ Schmidt, G.M. Thomas; Koepke, Jürgen; Frank, Ronald; Skerra, Arne (1996). Molecular en interacción entre el Strep-tag afinidad péptido y su cognado blanco, estreptavidina. Diario de la Biología Molecular 255 (5): 753 – 66. doi:10.1006/jmbi.1996.0061. PMID8636976.
- ^ McNutt, Markey C.; Lagace, Thomas A.; Horton, Jay D. (2007). "Actividad catalítica no es requerido para PCSK9 secretada para reducir la baja densidad de lipoproteína receptores en las células HepG2". Diario de química biológica 282 (29): 20799-803. doi:10.1074/jbc. C70009520. PMID17537735.
- ^ Zakeri, Bijan; Howarth, Mark (2010). "Formación de Bond amida intermoleculares espontánea entre las cadenas laterales de Targeting Peptide Irreversible". Revista de la sociedad química americana 132 (13): 4526-7. doi:10.1021/ja910795a. PMID20235501.
- ^ Zakeri, Bijan; Fierer, O. de Jacob; Celik, Emrah; Chittock, Emily C.; Schwarz-Linek, Ulrich; Moy, Vincent T.; Howarth, marca (2012). "Etiqueta de péptido formando un rápido enlace covalente a una proteína, a través de la ingeniería una adhesina bacteriana". Actas de la Academia Nacional de Ciencias 109 (12): E690 – 7. Bibcode:2012PNAS... 109E.690Z. doi:10.1073/pnas.1115485109. PMC3311370. PMID22366317.
- ^ Minde, David P; Halff, Els F; Bronceados, Sander (2013). "Diseño de desorden: cuentos de las colas inesperadas". Proteínas Intrínsicamente Desordenadas 1:: 5-15. doi:10.4161/IDP.26790.
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