Fosmid

Fosmids son similares a cósmidos pero se basan en la bacteriana F-plasmid. El vector de clonación es limitado, como un host (generalmente E. coli) sólo puede contener una molécula de fosmid. Fosmids puede contener insertos de DNA de hasta 40 kb de tamaño; la fuente del parte movible está a menudo al azar de ADN genómico. Una biblioteca de fosmid se prepara por extracción del ADN genómico del organismo de destino y la clonación en el vector de fosmid. La combinación de ligadura es luego empaquetada en partículas de fago y está transfected la DNA en el anfitrión bacteriano. Clones bacterianos propagarán la biblioteca fosmid. La copia bajo número ofrece una mayor estabilidad de vectores con números de copia relativamente más altos, incluyendo cósmidos. Fosmids puede ser útil para la construcción de las bibliotecas estables del complejo genomas. Fosmids tienen alta estabilidad estructural y se han encontrado para mantener el ADN humano con eficacia incluso después de 100 generaciones de crecimiento bacteriano. Fosmid clones fueron utilizados para ayudar a evaluar la exactitud de la secuencia del genoma humano pública.

Descubrimiento

El plásmido de fertilidad o F-plasmid fue descubierto por Esther Lederberg y codifica la información para la biosíntesis de pilus del sexo ayuda en la conjugación bacteriana. Verbal implica el uso del pilus del sexo para formar un puente entre las células de dos bacterias; el puente permite a la célula F + a transferir una sola copia del plásmido para que ambas células contienen una copia del plásmido. En la manera en la célula receptora, la correspondiente cadena de ADN es sintetizada por el destinatario. La célula donante mantiene una copia funcional del plásmido. Más tarde se descubrió que el factor F fue el primero Episome y puede existir como un plásmido independiente lo que es un vector muy estable para la clonación. SIDA de verbal en la formación de bibliotecas de clones bacterianos asegurándose de que todas las células contiene la fosmid deseada.

Fosmids son vectores de ADN que utilizan el origen F-plasmid de replicación y partición mecanismos para permitir la clonación de grandes fragmentos de ADN. Una librería que proporciona cobertura redundante de 20 – 70 veces del genoma se puede preparar fácilmente.

Bibliotecas de ADN

El primer paso en genomas toda la secuencia es la clonación del genoma en unidades manejables de unos 50-200 kilobases en longitud. Es ideal para usar una biblioteca de fosmid debido a su estabilidad y limitación de un plásmido por célula. Limitando el número de plásmidos en las células que disminuye el potencial de recombinación, preservando así la inserción del genoma.

Fosmids contienen varios elementos funcionales:

• OriT (origen de la transferencia): la secuencia que marca el punto de partida de la transferencia conjugativa.
• OriV (origen de replicación): la secuencia comenzando con el cual será replicado el ADN plásmido en la célula receptora.
• tra-región (transferencia de genes): proceso de transferencia de Genes que codifican el Pilus de F y el ADN.
• ES (inserción de elementos): llamados "genes egoístas" (secuencia de fragmentos que pueden integrar copias de sí mismos en distintos lugares).

Un ejemplo de un fosmid asignado puede encontrarse aquí https://What-When-how.com/Molecular-Biology/f-plasmid-Molecular-Biology/

Se han perfeccionado los métodos de corte y la inserción de ADN en vectores fosmid. Ahora hay muchas empresas que pueden crear una biblioteca de fosmid de cualquier muestra de ADN en un período muy corto de tiempo a un costo relativamente bajo. Esto ha sido vital en permitiendo a los investigadores secuenciar genomas numerosos para estudio. A través de una variedad de métodos, más 6651 genomas de organismos han ha completamente secuenciados, con 58.695 continua.

Utiliza

A veces es difícil distinguir con precisión los cromosomas individuales basados en longitud del cromosoma, cociente del brazo y patrón de bandeo C. Fosmids puede ser utilizado como marcadores citológicos confiables para la identificación de cada cromosoma y la hibridación in situ fluorescente basado en metafase cromosomas cariotipos pueden utilizarse para mostrar si las posiciones de estos fosmids fueron construidas con éxito.

El sistema de fosmid es excelente para rápidamente crear bibliotecas de mini-BAC cromosoma-específicas de flujo ordenados de ADN cromosómico. La principal ventaja de Fosmids sobre otros sistemas del cósmido radica en su capacidad de propagación estable de fragmentos de ADN humanos. Altamente repetitivos en la naturaleza humana ADN es bien conocida por su extrema inestabilidad en sistemas de multicopy vector. Se ha encontrado que la estabilidad aumenta dramáticamente cuando los insertos de DNA humanos están presentes en copias solos en células de e. coli deficiente de recombinación. Por lo tanto, Fosmids sirven como sustratos confiables para la secuenciación del ADN genómico a gran escala.

Herramientas útiles tales como la Base de datos NCBI nucleótido permiten a los investigadores a buscar otras bibliotecas fosmid comparar para secuencias de ADN homólogas entre especies.

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