Inmunoperoxidasa
Inmunoperoxidasa es un tipo de immunostain utilizado en biología molecular, investigaciones médicas y diagnóstico clínico. En particular, reacciones de inmunoperoxidasa se refieren a una sub-clase de procedimientos immunohistochemical o inmunocitoquímica en la que los anticuerpos son visualizados mediante una reacción catalizada por la peroxidasa.
Immunohistochemistry y inmunocitoquímica son métodos utilizados para determinar en que las células o partes de las células de un determinado proteína o de otro macromolécula se encuentran. Estas manchas use anticuerpos para enlazar a específicos antígenos, generalmente de proteínas o glicoproteína origen. Puesto que los anticuerpos son normalmente invisibles, estrategias especiales deben ser empleados para detectar estos anticuerpos encuadernados. En un procedimiento de inmunoperoxidasa, un enzima conocido como un peroxidasa de se utiliza para catalizar la un reacción química para producir un producto coloreado.
Simplemente, una rebanada muy fina del tejido se fija sobre el vidrio, que se incubaron con anticuerpos o con una serie de anticuerpos, la última de las cuales está ligada químicamente a la enzima peroxidasa. Después de desarrollar la mancha mediante la adición de la sustancia química sustrato, la distribución de las manchas puede ser examinada por microscopia.
Contenido
- 1 Tipos de anticuerpos
- 2 Métodos para tinción de inmunoperoxidasa
- 3 Alternativas a las manchas de peroxidasa
- 4 Usos de la tinción de inmunoperoxidasa
- 5 Véase también
- 6 Enlaces externos
Tipos de anticuerpos
Originalmente eran todos los anticuerpos producidos para la inmunotinción policlonal, es decir, levantado por las reacciones de anticuerpos normales en animales tales como caballos o conejos. Ahora, muchos son monoclonal, es decir, producidos en cultivo de tejidos. Anticuerpos monoclonales que constan de un único tipo de anticuerpo tiende a proporcionar una mayor especificidad de antígeno y también tienden a ser más consistente entre lotes.
Métodos para tinción de inmunoperoxidasa
El primer paso en la tinción de inmunoperoxidasa es la Unión de los anticuerpos específicos (primario) a la muestra de tejido o célula. La detección del anticuerpo primario puede realizarse entonces directamente (ejemplo 1) o indirectamente (ejemplos 2 y 3).
- Ejemplo 1. El anticuerpo primario puede ser etiquetado directamente con el peroxidasa de enzima que se utiliza para catalizar una reacción química para generar un producto coloreado.
- Ejemplo 2. El anticuerpo primario puede ser etiquetado de una pequeña molécula que puede ser reconocida por una molécula enlace conjugado con peroxidasa con alta afinidad. El ejemplo más común de esto es un biotina anticuerpo primario vinculado que se une a una enzima-enlazado estreptavidina. Este método puede utilizarse para ampliar la señal.
- Ejemplo 3. Se detecta un anticuerpo primario sin etiquetar uso general anticuerpo secundario reconoce los anticuerpos procedentes de la misma especie animal que la primaria. El anticuerpo secundario es marcado con la enzima peroxidasa.
Tinción óptima depende de varios factores incluyendo la dilución del anticuerpo, los químicos tinción, la preparación y fijación de las células y tejidos y la duración de incubación con reactivos anticuerpos, tinción. Estos son determinados a menudo por ensayo y error en lugar de cualquier tipo de enfoque sistemático.
Alternativas a las manchas de peroxidasa
Otras enzimas como catalizadores fosfatasa alcalina puede utilizarse en lugar de peroxidasas de directo e indirecto de los métodos de tinción. Alternativamente, el anticuerpo primario puede detectarse mediante fluorescente etiqueta (inmunofluorescencia), o ser unido a partículas de oro coloidal para microscopia electrónica.
Usos de la tinción de inmunoperoxidasa
Tinción de inmunoperoxidasa se utiliza en diagnóstico clínico y en investigación de laboratorio.
En diagnóstico clínico, inmunotinción puede utilizarse en biopsias de tejido para más detalle histopatológica estudio. En el caso de cáncer, puede ayudar en la clasificación de los tumores. Inmunotinción puede utilizarse también para ayudar a diagnosticar enfermedades de la piel, glomerulonefritis y sub clasificar amiloide depósitos. Técnicas relacionadas también son útiles para escribir el linfocitos que todos se parecen bastante en microscopia ligera.
En la investigación de laboratorio, los anticuerpos contra los marcadores específicos de diferenciación celular puede utilizarse para identificar tipos celulares individuales. Esto puede permitir una mejor comprensión de cambios mecanicistas a linajes celulares específicas resultantes de una intervención experimental particular.
Véase también
- Ensayo de inmunoperoxidasa indirecta
Enlaces externos
- Protocolos de immunohistochemistry, Buffers y solución de problemas