Kodecyte

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Analogía estructural de un girasol a modelos de llenado de espacio de las construcciones de la FSL. Las dos construcciones FSL de la izquierda son FSL-péptidos basado en parcialmente carboxymethylated oligoglycine (CMG2) espaciadores con lípidos 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine (droga). Las construcciones de 3ª y 4ª son FSL-biotina basado en CMG pero con DROGA y esteroles (δ-oxycarbonylaminovaleric derivado de ácido de colesterol) lípidos, respectivamente. La construcción final de la FSL es un trisacárido típico, conjugado a través de un O (CH 2) 3Espaciador de NH a un derivado activado adipato de los lípidos de Diacilo droga.

A kodecyte es un célula viva ha sido modificado (koded) por la incorporación de uno o más construye la función de separador de lípidos (FSL construcciones)[1][2] para obtener una función biológica, química o tecnológica nueva o novedosa. La célula se modifica por la cola de lípidos de la Construcción FSL incorporar en el membrana bilipid de la célula.

Kodecytes todos conservar su normal vitalidad y mientras la nueva función de los constructos FSL insertados. La combinación de dispersabilidad en biocompatibles los medios de comunicación, incorporación espontánea de las membranas celulares y baja toxicidad aparente, hace Construcciones FSL conveniente como herramientas de investigación para el desarrollo de nuevo diagnóstico y terapéutica aplicaciones.

Contenido

  • 1 La tecnología de
  • 2 Metodología
  • 3 Nomenclatura
  • 4 Aplicaciones
  • 5 Referencias
  • 6 Enlaces externos

La tecnología de

A membrana plasmática modificado con construcciones FSL (por analogía al girasol), creando una membrana kodecyte.

KODE FSL construcciones consisten en tres componentes;[3] un funcional parte de la (F), un espaciador (S) y un lípido (L).

Incluyen grupos de función construcciones FSL que puede utilizarse para crear kodecytes sacáridos (incluyendo Grupo sanguíneo ABO-relacionadas con determinantes,[3][4][5] ácidos siálicos, hyaluronin polisacáridos), fluoróforos,[6] biotina,[7] y una gama de péptidos.[8][9][10][11][12][13][14][15][16]

Para más información sobre grupos funcionales FSL, ver § Función-espaciador-Lipid_construct Functional_Groups.

Aunque kodecytes se crean mediante la modificación de las células naturales, son diferentes de las células naturales. Por ejemplo, construcciones FSL, influenciadas por la composición de la cola de lípidos, son móviles lateralmente en la membrana y algunas construcciones FSL también pueden cluster debido a las características del grupo funcional (F).[1] Como FSL construcciones están ancladas en la membrana mediante una cola de lípidos (L) se cree que no participan en señal transducción de señales, pero pueden estar diseñados para actuar como agonistas o antagonistas del evento inicial obligatorio. FSL construye activamente no pasará a través de la membrana plasmática pero puede entrar en la célula mediante endocitosis y la invaginación de la membrana.[6]

«Koding"de las células es estable (sujeto a la tarifa de facturación de los componentes de la membrana). FSL construcciones permanecerá en la membrana de las células inactivas (e.g. células de sangre rojas) durante la vida útil de la celda siempre se almacena en medios libres de lípidos.[6] En la circulación periférica que FSL construye se observan pérdida de glóbulos rojos kodecytes a una tasa de alrededor del 1% por hora.[7][17] La dosis inicial "koding" y el nivel mínimo requerido para la detección de determinan cuánto puede controlarse la presencia de "kodecytes" en la circulación. Para sangre "kodecytes" confiable de monitoreo de la presencia de la "kodecytes" durante 3 días post administración intravenosa se ha demostrado en mamíferos pequeños.[7]

El espaciador (S) de una construcción FSL ha sido seleccionado para tener insignificante reactividad cruzada con los anticuerpos del suero para que kodecytes pueda usarse con suero no diluido. Al aumentar la longitud del espaciador FSL de 1,9 a 7,2 nm se ha demostrado sensibilidad puede mejorar dos veces en eritrocitos aglutinación basado en los ensayos de kodecyte. Sin embargo, aumentar el tamaño del espaciador lejos de 7.2 a 11.5 nm no produjo ninguna mejora adicional.[1]

Metodología

Preparación de kodecytes. Simplemente mezcle las células con una solución FSL (contiene 1 o más FSLs) e incubar durante 10 – 120 minutos a 37 ° C (o a temperaturas tan bajas como 4 ° C). Las construcciones se incorporan espontáneamente en la membrana y más pasos no son necesarios.

Construcciones FSL, cuando está en solución)solución salina) y en contacto, espontáneamente se incorporan en las membranas celulares.[18] La metodología implica simplemente preparar una solución de construct(s) FSL en el rango de 1-1000 µg/mL, con la concentración utilizada determinar la cantidad de antígeno presente en la kodecyte. Ha permitido que la capacidad de controlar los niveles de antígeno en el exterior de un kodecyte para la fabricación de sistemas de control de calidad de sensibilidad[2] y kits serológicos enseñanza incorpora toda la gama de reacciones de aglutinación serológica.[19] La concentración real dependerá de la construcción y la cantidad de construcción requerido en la membrana. Una parte de solución FSL se agrega a una parte de las células (hasta 100% suspensión) y se incuban a una temperatura dentro del rango de 4 – 37 ° C (39-99 ° F) dependiendo de la compatibilidad de la temperatura de las células está siendo modificado. A mayor temperatura, más rápido la tasa de inserción de FSL en la membrana. De glóbulos rojos alcanza la incubación durante 2 horas a 37 ° C > inserción de FSL de 95% con al menos 50% inserción están alcanzando a los 20 minutos. En general, para basados en carbohidratos FSLs inserción en células de sangre rojas, incubación durante 4 horas a temperatura ambiente o 20 horas a 4 ° C son similares a una hora a 37 ° C.[18] Los kodecytes resultantes no no requiere ser lavado, sin embargo se debe considerar esta opción si se utiliza un exceso de construcción de FSL en el proceso de koding.

También se pueden crear Kodecytes en vivo por inyección de construcciones directamente en la circulación.[17] Sin embargo este proceso de modificar todas las células en contacto con las construcciones y generalmente requieren construir significativamente más que en vitro preparación, como FSL construye preferentemente asociarán con lípidos libres.[17] El en vivo creación de kodecytes es no focalizado y construcciones FSL se inserte en todas las células no específicamente, pero pueden mostrar una preferencia por algunos tipos de células.

Análisis serológicos de diagnósticos[3] incluyendo Citometría de flujo[4] y microscopía electrónica de barrido generalmente no puede ver una diferencia entre "kodecytes" y sin modificar las células. Sin embargo, en comparación con las células naturales allí parecen ser una diferencia entre IgM y De igG reactividades del anticuerpo cuando el grupo funcional (F) es un antígeno péptido monomérica. Los anticuerpos IgM aparecen a reaccionar mal con kodecytes elaborado con péptidos FSL.[8][15] Además construcciones FSL pueden tener un antígeno restringido/epitopo y no pueden reaccionar con un anticuerpo monoclonal a menos que la construcción FSL y anticuerpo monoclonal son complementarias.[8][15]

Kodecytes puede ser estudiada mediante técnicas histológicas estándar. Kodecytes puede ser fijado después de "koding" sujeta a la parte funcional (F) de la FSL construir siendo compatible con el fijador. Sin embargo, congelar cortado o tejidos corte congelación formalina-fijos son necesarios porque el lípido basada FSL construcciones (y otros glucolípidos) se lixiviará desde el "kodecytes" en las muestras de parafina incrustado durante los pasos de desparafinación con.[18]

Nomenclatura

Membranas Koded son descritas por la construcción y la concentración de FSL (en µg/mL) utilizada para crearlos.[18] Por ejemplo kodecytes con una solución de 100 μg/mL de FSL-A denominarse kodecytes A100. Si múltiples construcciones FSL se utilizaron entonces la definición se amplía en consecuencia, e.g. A100 + B300 kodecytes se crean con una solución que contiene 100 µg/mL de solución de FSL-A y 300 μg/mL de solución de FSL-B. El símbolo "+" se utiliza para separar las mezclas de la construcción, e.g. A100 + B300. Si las concentraciones de FSL son constantes entonces el componente μg/mL de la terminología puede ser caído, por ejemplo, un kodecytes. Como alternativa, no relacionado con construcciones como FSL-A y FSL-biotina creará un + biotina kodecytes, etc.. Si se utilizan células diferentes en el mismo estudio y luego se recomienda la inclusión del tipo de célula en el nombre, e.g. A100 RBC kodecytes vs A100 del CMB kodecytes, o kodecytes plaquetas A100, etc..

Aplicaciones

KODE tecnología ha sido utilizada para la en vitro modificación de murino embriones, espermatozoides, pez cebra, epiteliales/endometrial las células y células de sangre rojas[3][4][9][10] para crear celulares sistemas, controles de calidad[2][8] kits serológicos,[19] raro antígeno expresión, añadir marcadores infecciosos en las células,[11][16] modificado células adherencia/interacción/separación/inmovilización,[6][7] y etiquetado.[4] También ha sido intravascularly infusión para en vivo modificación de las células sanguíneas y neutralización de circulación anticuerpos[17][20] y en en vivo proyección de imagen de circulantes médula ósea kodecytes en pez cebra.[21]

Referencias

  1. ^ a b c Korchagina, Elena; Tuzikov, Alejandro; Formanovsky, Andrey; Popova, Inna; Henry Stephen; Principales, Nicolai (2012). "Hacia la creación de glycolandscapes de la membrana de la célula con glicanos lípidos construye". Investigación de hidratos de carbono 356:: 238 – 46. doi:10.1016/j.Carres.2012.03.044. PMID22551471.
  2. ^ a b c Henry, Stephen M (2009). "Uso de modificación de glóbulos rojos para control de calidad de laboratorio". Opinión actual en hematología (Opinión actual en hematología) 16 (6): 467 – 472. doi:10.1097/Moh.0b013e328331257e. PMID19680123.
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Enlaces externos

  • [1] Cómo funciona la tecnología KODE
  • [2] Aplicaciones de kodecytes
  • [3] CSL aplicación de kodecytes

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