NanoDSF

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nanoDSF es una modificación Fluorimetría exploración diferencial método para determinar estabilidad de la proteína empleando intrínseca fluorescencia del Tryptophan.[1][2] nanoDSF fue desarrollado por NanoTemper Technologies GmbH, una empresa de alta tecnología alemana con sede en Munich.

Estabilidad de la proteína típicamente es tratado por experimentos desplegamiento térmicos o químicos.[3] En experimentos de despliegue termales, una rampa de temperatura lineal se aplica para desdoblar las proteínas, mientras que los experimentos químicos que usan químicos desnaturalizantes en concentraciones crecientes. La estabilidad térmica de una proteína es generalmente descrita por los 'temperatura de fusión' o 'Tm', en el que 50% de la proteína población está desplegado, correspondiente al punto medio de la transición del doblado de desplegado.

En contraste con convencional DSF métodos, nanoDSF utiliza fluorescencia del tryptophan para supervisar el despliegue de proteína. La intensidad de fluorescencia y el máximo de fluorescencia depende fuertemente de las proximidades del triptófano.[4] Por lo tanto, la relación de las intensidades de fluorescencia a 350 nm y 330 nm es conveniente detectar cualquier cambio en la estructura de la proteína, por ejemplo debido al despliegue de la proteína.

Curvas de despliegue termales y despliegue puntos medios de transición de dos anticuerpos monoclonales. (A) térmicas curvas despliegue de dos anticuerpos monoclonales en presencia de 25 mM citrato de Na en valores de pH diferentes. Apliques de mostrar la dependencia de pH de la primera mitad despliegue (Tm1). (B) dependencia de Tm1 y Tm2 el pH del buffer de todas las condiciones probadas.

Sus aplicaciones incluyen ingeniería de anticuerpos, proteína de la membrana investigación, control de calidad y formulación desarrollo.[5]

Referencias

  1. ^ Florian Käufl / Frank Rapp. "NanoTemper Technologies GmbH: nanoDSF". nanotemper-technologies.com.
  2. ^ "Ingeniería genética y biotecnología noticias".
  3. ^ Senisterra G et al. "Ensayos de desnaturalización térmica en Biología química.". NIH.gov.
  4. ^ "Principios de la espectroscopia de la fluorescencia". Springer.com.
  5. ^ Florian Käufl / Frank Rapp. "Notas de aplicación: nanoDSF tecnología". nanotemper-technologies.com.

Enlaces externos

  • NanoTemper tecnologías

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