Reacción en cadena de polimerasa inversa
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Reacción en cadena de polimerasa inversa (Polimerización en cadena inversa) es una variante de la reacción en cadena de polimerasa se utiliza para amplificar DNA con solamente una secuencia conocida. Una limitación de la PCR convencional es que requiere cartillas de complementarios a los dos Termini del destino de ADN, pero este método permite PCR para llevarse a cabo incluso si hay solamente una secuencia de cebadores que pueden diseñarse.
PCR inverso es especialmente útil para la determinación de insertar localizaciones. Por ejemplo, varios retrovirus y Transposons integrar al azar extracción de ADN genómico. Para identificar los sitios donde han entrado, el conocido, "interno" viral o transposon secuencias pueden utilizarse para diseñar primers que amplificarán una pequeña porción de flanqueo, ADN genómico "externo". El producto amplificado puede entonces ser ordenado y en comparación con con bases de datos de ADN para localizar la secuencia que se ha visto alterada.
El método PCR inverso consiste en una serie de resúmenes de la restricción y ligadura de, resultando en un fragmento de bucle que puede ser preparado por PCR a partir de una sola sección de secuencia conocida. Entonces, como otros procesos de la reacción en cadena de polimerasa, el ADN es amplificado por el sensible a la temperatura Polimerasa de la DNA:
- Se identifica una región del objetivo con una sección interna de secuencia conocida y desconocidas regiones que flanqueaban
- ADN genómico es digerido en fragmentos de unos pocos kilobases por un corte de frecuencia normalmente baja-moderada (base 6-8) enzima de restricción.
- En bajas concentraciones de ADN, uno mismo-ligadura se induce a dar un producto circular de la DNA.
- PCR se realiza como de costumbre, con las cartillas complementarias a las secciones de la sequence.* interno conocido
Finalmente se compara la secuencia con la secuencia en la base de datos.
- Nota: aunque la figura indica que el producto de la ligadura circular se digiere antes de la polimerización en cadena, este no es el caso. PCR no requiere productos lineales y también podría reducir el uso de otra enzima de restricción para cortar la secuencia conocida dentro de la región desconocida, dando por resultado una PCR fallida.
Referencias
- "Aplicaciones genéticas de una reacción en cadena de polimerasa inversa". https://www.Genetics.org.
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