Southwestern blot
Southwestern Blot, basado a lo largo de las líneas de Borrar meridional (que fue creado por Edwin meridional) y primero descrito por B. Bowen, J. Steinberg y colaboradores en 1980,[1] es una técnica de laboratorio que consiste en identificar y caracterizar proteínas de unión al ADN (proteínas vinculan a DNA)[2] por su capacidad para enlazar a oligonucleótido específicas sondas. Las proteínas se separan por electroforesis en gel de y posteriormente se transfieren a nitrocelulosa membranas similares a otros tipos de borrar.
El nombre de Southwestern Blot está basado en el hecho de que esta técnica detecta proteínas DNA-que atan, ya que es de detección de ADN por Borrar meridional y detección de proteínas por El borrar occidental.
Sin embargo, desde el primer blottings al sudoeste, muchos más han sido propuestos y descubierto. Los protocolos anteriores fueron obstaculizados por la necesidad de grandes cantidades de proteínas y su susceptibilidad a la degradación mientras que siendo aislado.
"Asignación de southwestern blot" se realiza para la caracterización rápida de proteínas DNA-que atan y sus sitios específicos en la DNA genomic. Las proteínas son separadas en un poliacrilamida gel)PÁGINA) que contiene dodecil sulfato de sodio (SDS), renatured mediante la eliminación de SDS en presencia de urea y borrado en nitrocelulosa por la difusión. La región genómica de ADN de interés es digerida por los enzimas de restricción seleccionado para producir fragmentos de tamaños apropiados pero diferentes, que son posteriormente etiquetado final y permitió enlazar a las proteínas separadas. El ADN específicamente es eluido de cada proteína individual-ADN complejo y analizado por electroforesis en gel de poliacrilamida. Se han presentado pruebas que proteínas de unión de ADN de tejidos específicos pueden ser detectadas mediante esta técnica. Además, su fijación de secuencia-específica permite la purificación de la correspondiente selectivamente limitados fragmentos de ADN y puede mejorar la proteína mediada por clonación de secuencias reguladoras del ADN.
Referencias
- ^ B Bowen, Steinberg J, Laemmli UK, Weintraub H (enero de 1980). "La detección de ADN-proteínas por proteínas borrar". Ácidos nucleic Res. 8 (1): 1 – 20. doi:10.1093/Nar/8.1.1. PMC327239. PMID6243775.
- ^ Southwestern Blot en las Estados Unidos Biblioteca Nacional de medicina Encabezamientos de temas médicos (MeSH)
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